重组DNA实验是基因工程的核心技术，指在体外通过酶作用构建杂种DNA分子并导入宿主细胞进行增殖的方法。该技术于20世纪70年代发展形成，1972年保罗·伯格首次实现猴病毒SV40DNA与大肠杆菌λ噬菌体DNA的体外重组，完成首个重组DNA实验；1973年斯坦利·科恩与赫伯特·博耶构建含抗性基因的重组质粒并导入大肠杆菌，实现首个基因克隆实验 。
实验过程中需使用限制性内切酶、DNA连接酶及质粒或病毒载体等工具。主要步骤包括目的基因获取（通过文库筛选、PCR扩增或人工合成）、载体构建（同切点连接）、细胞转化（采用Ca²⁺处理、农杆菌转化或显微注射）及检测鉴定（通过分子杂交或表型筛选）。该技术使异种生物间基因重组体的构建成为可能，典型案例包括将人胰岛素基因导入大肠杆菌实现工业化生产 。
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