
色谱分析的重要作用之一是对样品进行定量。色谱法定量的依据是:组分的重量或在载气中的浓度与检测器的响应信号成正比。常见定量分析方法分为面积归一化法、内标法、外标法等。今天,给大家科普最易混淆的内标法和外标法。
首先用待测组分的标准样品绘制标准工作曲线。具体如下:
用标准样品配制成不同浓度的标准系列,在与待测组分相同的色谱条件下,等体积准确量进样,测量各峰的峰面积或峰高,用峰面积或峰高绘制标准曲线,此标准曲线应是通过原点的直线。
若标准曲线不通过原点,说明测定方法存在系统误差。标准曲线的斜率即为绝对校正因子。
当待测组分含量变化不大,并已知这一组分的大概含量时,也可不绘制标准曲线,而采用单点校正法即直接比较法定量。
单点校正法实际上是利用原点作为标准曲线上的另一个点,当标准曲线不通过原点时,将导致分析结果有较大误差。
标准曲线法的优点:
绘制好标准工作曲线后,可直接从标准工作曲线上读出含量数据,对大量样品分析十分适用。
标准曲线法的缺点:
每次样品分析的色谱条件(检测器的响应性能、柱温度、流动相流速及组成、进样量、柱效等)很难完全相同,容易出现较大误差。
此外,绘制标准曲线时,需要已知准确含量的标品,因此对样品前处理过程中待测组分的变化无法进行补偿。
选择适宜的物质作为待测组分的参比物,定量加到样品中,依据待测组分和参比物在检测器上的响应值(峰面积或峰高)之比和参比物加入的量进行定量分析的方法称为内标法。
内标法的关键是选择合适的内标物。内标物应是原样品中不存在的纯物质,其性质应尽可能与待测组分相近,并不与待测样品起化学反应,同时要能完全溶于待测样品中。
内标物的峰应尽可能接近待测组分,或位于几个待测组分的峰中间,但必须与样品中所有的峰不重叠,即完全分开。
内标法的优点:
进样量的变化、色谱条件的微小变化对内标法定量结果的影响不大,特别是在样品前处理(如浓缩、萃取,衍生化等)前加入内标物,可部分补偿待测组分在样品前处理时的损失。
若要获得高精度的定量分析结果,可加入数种内标物。
内标法的缺点:
选择合适的内标物比较困难,内标物的称量要准确,操作较麻烦。
外标法是用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线,测出样品的峰面积或峰高,在标准曲线上查出其对应的浓度,这是最常用的一种定量方法。
内标法是将一定量的纯物质作内标物,加入到准确称量的试样中,根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比,来计算被测组分的含量。
外标法简便,但进样量要求十分准确,要严格控制在与标准物相同的操作条件下。
内标法测定的结果较为准确,在一定程度上消除操作条件等的变化所引起的误差,但操作程序较为繁琐,每次分析时内标物和试样都要准确称量,有时寻找合适的内标物也困难。
综上所述,如外标法简便省事,如能满足实验要求,首选外标法。对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的条件下,可选内标法。
